La presencia de mosaicismo tanto en tratamientos de fecundación in vitro como en los embarazos naturales es infrecuente, con una prevalencia que oscila entre el 0,2- 0,4% de los embarazos.
Las plataformas actuales de secuenciación masiva (NGS) utilizadas en los programas de PGT-A son muy sensibles, y cuando se usan para analizar biopsias embrionarias de trofoectodermo (TE), son capaces de identificar la presencia de mosaicismo (mezcla de células euploides y aneuploides).
Sin embargo, la incidencia de mosaicismo reportada por los diferentes laboratorios es muy variable, oscilando entre un 2% y un 40%, lo que repercute en la cantidad de embriones euploides que se consideran viables para su transferencia.
Esta variabilidad entre laboratorios esta causada:
• Por la variabilidad biológica de las biopsias de TE, como son el número y la calidad de las células biopsiadas.
• Por la variabilidad técnica del análisis por NGS, donde una elevada dispersión o ruido no podrían distinguirse de un verdadero mosaicismo.
• Por la variabilidad en los criterios analíticos para la clasificación de mosaicismo.
Por ello, es importante antes de implementar un protocolo de NGS en un laboratorio de diagnóstico clínico, realizar una VALIDACIÓN ANALÍTICA INTERNA para identificar correctamente las biopsias con resultados sugerentes de mosaicismo.
Para validar un protocolo semiautomatizado de NGS para PGT-A necesitamos:
• Definir la resolución de la plataforma de NGS que nos permita detectar deleciones/duplicaciones parciales y establecer los umbrales para identificar la presencia de mosaicismo.
• Crear un pipeline bioinformático y un algoritmo de diagnóstico automáticos, para evitar la subjetividad ligada a la visualización de los datos genómicos.
En base a nuestra validación analítica de PGT-A, hemos establecido los siguientes umbrales para identificar la presencia de mosaicismo:
El mosaicismo cromosómico embrionario ha sido uno de los temas más candentes en la comunidad de ART durante los últimos años.
Con el uso de las plataformas de NGS en PGT-A, los laboratorios y clínicas comenzaron a informar de la presencia de mosaicismo. Ante la ausencia de estudios mostrando el valor predictivo positivo o negativo del pronóstico reproductivo de embriones transferidos con este diagnóstico, los embriones mosaico han sido descartados hasta la fecha o se han transferido como última opción.
Nuestra incidencia promedio de mosaicismo es
Estos datos sugieren que únicamente alrededor del 4% de todos los embriones serán diagnosticados como embriones con mosaicismo de bajo grado (<50%) y necesitarán asesoramiento genético adicional si son considerados para transferencia.
Algunos estudios recientes sugieren que los embriones con mosaicismo de bajo grado (<50%) presentan mayor potencial reproductivo que los embriones aneuploides, pero tasas de implantación más bajas y mayor riesgo de aborto espontáneo que los embriones euploides.
(Viotti et al., 2021)
Nuestro estudio prospectivo no selectivo (Capalbo et al., 2021) muestra que los embriones con mosaicismo de bajo grado (<50%) tienen un potencial reproductivo equivalente al de los embriones euploides. Así, y de acuerdo con las nuevas recomendaciones de la ESHRE y el PGDIS, los embriones con mosaicismo de bajo grado deben considerarse para transferencia de igual manera que los embriones euploides, priorizándose de acuerdo a su morfología.
(Capalbo et al., 2021; PGDIS Position Statement on the Transfer of Mosaic Embryos 2021; ESHRE Good practice recommendations on Chromosomal Mosaicism 2021)
VALIDACIÓN CLÍNICA
A continuación pasamos a detallar nuestros estudio non-selection de transferencia de embriones con niveles de mosaicismo por debajo del umbral del 50%. En este estudio todos los embriones con niveles de mosaicismo inferiores al 50% se informaron como euploides, y entre ellos se priorizó la transferencia en función de su morfología. Este estudio lo podemos considerar como la primera validación clínica realizada sobre el potencial reproductivo de los embriones con niveles de mosaicismo leves o moderados. Tras la transferencia embrionaria, se realizó el siguimiento de las pacientes y tras conocer los resultados de la transferencia, estos se analizaron en tres grupos en función del grado de mosaicismo observado (grupos A, B y C).
RESULTADOS:
Los resultados reproductivos fueron similares en los tres grupos analizados (euploides, mosaicismo 20-30% y mosaicismo 30-50%). El seguimiento de las gestaciones procedentes de embriones con mosaicismo <50% ha mostrado que no aumenta el riesgo para el embarazo (aborto espontaneo/anomalías estructurales fetales y del desarrollo) ni para el bebé con respecto a la transferencia de embriones euploides.
Estos resultados sugieren que el número de copias intermedio (<50%) en las biopsias de TE podría deberse a variaciones técnicas o a mosaicismo confinado a una pequeña porción del TE, sin implicación para la masa celular interna ni el embarazo.
A modo teórico, descartar para la transferencia los embriones con mosaicismo del 20-50% implicaría una reducción general del 36% en la tasa acumulada de nacidos vivos. En los casos en los que se descartasen los embriones con mosaicismo del 30-50%, esta reducción sería tan solo del 11%.
De acuerdo con las nuevas recomendaciones de ESHRE – PGDIS, este estudio proporciona nuevas evidencias de que los embriones con mosaicismo <50% tienen un potencial reproductivo y unos riesgos gestacionales similares a los embriones euploides, y deben considerarse igualmente para su transferencia.
